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干化学尿液自动分析仪由于其操作简单、快速,检测少量尿液就可获得多项实验参数,有利于临床诊断,减少了实验室工作强度,故得到广泛应用。现将主要的几种检测项目反应原理分述如下。 (1) 尿pH试纸条:一般用甲基红(pH4.6~6.2),嗅香草酚蓝(pH6.2~7.8)二种指示剂组成为复合pH试纸。其呈色范围pH5~9,从酸性至碱性尿,则由橙、绿到蓝色。 (2) 尿蛋白试纸条:试纸中含有四溴酚蓝指示剂、柠檬酸、柠檬酸钠和表面活性剂组成的缓冲液。四溴酚蓝在尿中解离成离子,和蛋白质离子结合后呈现蓝色。尿液pH在3∽7.5之间应用,如尿pH大于8.0,无论尿中有无蛋白质均可呈阳性反应。四溴酚蓝对白蛋白反应,而对蛋白难以引起反应。当盛尿容器被氨污染时会引起假阳性,操作时试纸条在尿中放置时间长,则因试剂渗入尿液中而失效。 (3) 尿葡萄糖试纸条:利用葡萄糖氧化酶对葡萄糖具有非常高的特异性而制成。试纸中葡萄糖氧化酶作用于尿中葡萄糖,同时利用空气中的氧和水反应生成过氧化氢和葡萄糖酸。纸中过氧化物酶再进一步产生过氧化氢,并分解出水和新生态氧,使试纸中邻联甲苯胺(色素元)氧化成绿色至蓝色的氧化态邻联甲苯胺。尿中维生素丙能竞争性夺取过氧化物中的氧,使结果呈假阴性;此外,漂白粉、次亚氯酸也可呈假阳性。 (4) 尿酮体试纸条:尿液中存在的脂肪酸代谢中间产物——酮体,包括乙酰乙酸、丙酮和β-羟基丁酸,其中乙酰乙酸在酸或碱性条件下和亚硝铁氰化钠起反应呈现紫色,而对β—羟基丁酸不反应。尿中头孢菌素、L-羟二苯氨酸等可呈假阳性反应。 (5) 尿隐血试纸条:血红蛋白中亚铁血红素具有过氧化物酶样活性,能使试纸条中的过氧化氢枯烯,移动其中的氧原子,氧化O─邻联甲苯胺(氧化色素原)使其呈蓝色,其对尿中血红蛋白、肌红蛋白起反应。尿中高浓度维生素丙时可呈假阳性反应。 (6) 尿胆红素试纸条:尿中胆红素与2,6二氯苯重氮盐、氟化硼酸盐结合,形成偶氮色素。胆红素和Hijmans Van den Bergh反应一样,用重氮盐攻击胆红素中央而使其裂开,结合形成2个分子的偶氮胆红素,呈现紫色,已氧化的胆绿素用本法不能检出,尿中含维生素呈假阴性;尿中含有氯丙嗪、酚噻嗪和吩嗪类药物也可呈假阳性。 (7) 尿胆素原试纸条:尿胆原试纸常用欧立氏醛法和偶氮结合法。用对二甲氨苯甲醛攻击中央碳原子,形成红色缩合物。尿但原在强酸条件下,和重氮盐偶联化形成胭脂红色素。欧立氏醛法反应后,从淡黄色到褐色即为阳性;偶氮结合法从白色到桃红色则为阳性。尿中含有磺胺类药物,易与试纸中的反应试剂的醛基缩合呈色,并能与吲哚、甲基吲哚、尿蓝母、叶绿素的分解物反应出现假阳性。连续应用抗生素者或尿中有亚硝酸盐者,可呈假阴性。 (8) 亚硝酸盐试纸条:健康人尿中存在硝酸盐,这是机体内的正常代谢产物。当大肠杆菌引起尿路感染时,可将尿液中的硝酸盐还原为亚硝酸盐。尿液中亚硝酸盐先与试纸中氨苯磺胺反应,形成重氮盐,再和3羟基--1、2、3、4-氨苯喹啉结合,形成紫色的偶氮色素(Manheim试纸)。尿路感染由大肠杆菌、肠科杆菌所致则为阳性;变形杆菌引起时呈弱阳性。细菌菌落计数大于10万/毫升时,试纸的敏感度为65.9%。尿液在膀胱停留时间过短,即使尿中有硝酸盐和革兰氏阴性杆菌,也不能形成亚硝酸盐。尿量过多,如糖尿病等,使亚硝酸盐浓度太低或所染细菌缺乏硝酸盐还原酶(如葡萄球菌)可为阴性。尿检前几天,如摄入食物中富含硝酸盐的人参、卷心菜、菠菜等,呈假阳性。 (9) 尿比重:纸条中的多聚电解质含有随标本中离子浓度而解离的酸性基团。尿中离子越多,酸性基团解离越多,释放出的氢离子使pH改变。当尿液中葡萄糖或尿素浓度大于1克/每百毫升时,试纸法测得的结果比其它方法偏低;而中等量蛋白质能使比重偏高,高缓冲容量的碱性尿可使结果偏低,因而有人建议尿液pH≥6.5时,比重应加0.005。 (10) 尿中白细胞酯酶试纸条:尿路炎症时,尿中白细胞(完整或溶解的细胞)内有白细胞酯酶,与3——吲哚氧羧酸酯作用,生成靛蓝色复合物,即为阳性。此酶不存在于正常血清、尿液或没有炎症的肾组织和白细胞内。如尿内存在蛋白、药物等干扰物质或异常pH时,或者尿中有滴虫,均可呈假阳性。尿液中白细胞数含量不同,经(+)、(++)、(+++)表示之,或者显示以每微升15个、70个、125个、500个的数字显示白细胞数目。 |