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引起病毒性肝炎的病原体主要是肝炎病毒，包括甲型肝炎病毒（HAV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、丁型肝炎病毒（HDV）、戊型肝炎病毒（HEV），近年来的研究表明，GB病毒（GBV）/庚型肝炎病毒（HGV）和输血传播病毒（TTV）。最近报导国外发现了SEN病毒（SENV），可能是解释目前仍有10~15%的病毒性肝炎患者病原学不清的问题。无论是那一种肝炎病毒感染引起的急性、慢性病毒性肝炎，根本原因是病毒复制和表达的存在，病毒的抗原诱发机体的免疫原理反应，造成肝脏炎症损害。因此，要从根本上解决病毒性肝炎的问题，从基因水平上，寻求阻断、抑制、甚至是清除肝炎病毒，是非常重要的思路。基因治疗是生物医学领域中研究的一个热点。 一、 基因治疗的概念和策略 基因治疗就是用正常或野生型基因校正或转换缺陷或致病基因的一种分子生物学水平的治疗方法。传统意义上的基因治疗（gene therapy），是指目的基因导入靶细胞以后与宿主细胞内的基因发生整合，成为宿营主细胞遗传物质的一部分，目的基因的表达产物起到对疾病的治疗作用。近些年来，采用某些基因转移技术，即使目的的基因和宿营主细胞的基因不发生整合，目的基因也可得到暂时表达。目的基因的表达产物也具有一定的治疗作用。这种基因治疗中应用的目的基因应象我们平常在临床上使用的药物一样。为了与传统意义上的基因治疗相区别，这种目的基因不与宿主细胞基因组发生整合，暂时表达产物发挥治疗作用的基因治疗方法叫做基因疗法（gene therapeutics）。 基因治疗中根据针对宿主病变细胞基因采取的措施不同，又分为基因转换（gene replacement），基因修正（gene correction），基因修饰（gene augmentation），基因灭活（gene inactivation）和基因疫苗（gene vaccine）等五大策略。基因灭活和基因疫苗是阻断和抑制肝炎病毒基因复制和表达的重要基因治疗手段。基因治疗的条件包括：目的基因的获得，靶细胞的选择以将目的基因导入窠主细胞基因转移的高效手段。基因治疗的步骤包括：目的基因的准备、受体细胞的培养、载体的选择、将目的基因导入到靶细胞等。 二、 病毒性肝炎的基因治疗 基因治疗在抗肿瘤，遗传性疾病和传染病的治疗中有十分重要的应用前景，近年来的研究表明，基因治疗在病毒性肝炎的治疗中也能发挥重要的影响。病毒性肝炎的基因治疗研究虽然取得了一系列的进展，但是，由于病毒性肝炎的发病机制还没有完全了解清楚，目前基因治疗在病毒性肝炎治疗中的应用远未达到最高水平。病毒性肝炎的基因治疗一方面取决于基因治疗技术本身发展的速度和状态，另一方面也取决于病毒性肝炎发病机制本身研究的深入程度。 （一） 淋巴因子转基因表达 淋巴因子在传染病治疗中具有十分重要的作用和广泛的应用前景。其中的干扰素（IFN）已成为目前抗肝炎病毒治疗唯一公认有效的基因工程药物。利用淋巴基因表达进行传染病的基因治疗研究，是基因治疗在传染病中的一个重要应用和重要的研究方向。 1、 干扰素的基因转移与表达 Seif等将小鼠的干扰素β（IFNβ）的基因置于主要组织相容性复合体（MHC）的启动子序列的控制之下，构建重组表达载体，转染Babl/c小鼠的成纤维细胞系NIH3T3，得到了持续的IFNβ的表达。表达IFNβ的细胞系，对滤泡口炎病毒（VSV，vesicular stomatitis virus），脑心肌炎病毒（EMCV，encephalomy-ocarditis virus）和塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus）的复制和表达均有明显的抑制作用。并发现持续低水平的IFNβ的分泌表达，就可以使这一细胞系产生明显的抗病毒状态。然而，用等量的外源重组的IFNβ则无此效果。而且，加入相应的IFNβ的单克隆抗体并不能阻断这种转导的细胞系对上述三种病毒的抑制效应。因此认为，此细胞系的抗病毒状态的产生，除了和分泌型IFNβ的表达有关以外，还有可能存在其它的作用方式。另外，Bednarik等将人的α2干扰素（IFNα2）的基因重组到人免疫缺陷病毒（HIV）的长未端重复序列（LTR）中的启动子下游，转入非洲绿肾细胞系中，IFNα2的分泌表达水平持续在50~150u/ml之间。这一低水平的IFNα2的表达完全可以抑制HIV的复制和转录。同样地也发现就用相应水平的外源重组的IFNα2也无此效果。而且IFNα2的单抗也不能阻断IFNα2的抗病毒作用。这一差别的原因，作者认为体内产生的IFNα2与体外重组的IFNα2的抗病毒机理不同。外源重组的IFNα2的抗病毒机理，是抑制HIV的成熟和装配过程，而内源表达的IFNα2的抗病毒作用，似乎是主要作用在转录水平以及HIV mRNA的稳定性等方面。 2、 白细胞介素-2的转基因表达 Guidotti等应用HBV DNA转基因小鼠，证实IL-2对HBV DNA转录的2.1kb的mRNA具有明显的抑制作用。认为IL-2对HBV DNA转录2.1kb mRNA的启动子活性有明显的负调控作用。同时，还通过肿瘤坏死因子（TNF）和γ干扰素（IFNγ）的诱生达到抗病毒的效果。因为肝细胞膜上没有IL-2的受体，所以认为IL-2的抗病毒作用是其对HBV DNA启动子活性的直接抑制使用来实现的。并且认为IL-2抑制HBV DNA的表达是在转录后水平上发生的。 |
